您好,欢迎进入北京质研科技有限公司网站!

当前位置:首页  >  技术文章  >  影响电穿孔技术应用的多种因素有哪些?

影响电穿孔技术应用的多种因素有哪些?

更新时间:2024-02-28  |  点击率:155
电穿孔,也叫电转染,是通过高强度的电场作用,瞬时提高细胞膜的通透性,从而吸收周围介质中的外源分子。这种技术可以将核苷酸、DNA 与RNA、蛋白、糖类、染料及病毒颗粒等导入原核和真核细胞内。电转化相对其它物理和化学转化方法,是一种有价值和有效的替代方法。
 
影响电穿孔技术应用的多种因素有哪些?
 
1、电脉冲幅度对电穿孔的影响
 
有研究表明,细胞电穿孔的z低电磁脉冲强度在450~600V/cm,低于这个强度,细胞不能被电穿孔。随着电磁脉冲强度的增加,电穿孔的效率提高,但并不成正比例,当场强达到一定值时,细胞的穿孔率不在增加。同时,当电磁脉冲强度达到一定值以后,随着电磁脉冲强度的增加,细胞的死亡率增加,当达到1000~1300V/cm以上时,细胞的死亡率显著增加。
 
2、电脉冲宽度对电穿孔的影响
 
一般说来有以下规律认识:脉冲宽度的下限必须比细胞膜充电的时间和膜的弹性恢复时间长,才能保持孔洞的开放。脉冲宽度和幅度之间存在互补关系,降低脉冲幅度,则需要加宽脉冲宽度来弥补,穿孔的效率往往和脉冲幅度与宽度的乘积成正比。
 
3、电脉冲个数对电穿孔的影响
 
脉冲次数一般在3~11个之间,增加脉冲个数能提高细胞电穿孔的效率。但是,当达到一定的脉冲个数时,穿孔几率不再增加。
 
4、电脉冲波形对电穿孔的影响
 
不同波形对细胞电穿孔也有重要的影响,目前用的最多的是直流方波脉冲和指数衰减的RC脉冲。研究表明,如果电穿孔脉冲在峰值电压击穿细胞膜后,能以较低的电压维持细胞膜孔洞开放一段时间,则有利于提高细胞电穿孔的效率,RC脉冲往往比相同幅度的直流脉冲更有效。RC脉冲更容易制造,效果较好,所以用得非常广。
 
5、胶体渗透压和细胞膨胀对电穿孔的影响
 
细胞被电脉冲击穿之后,水与一些离子可以自由进入,但大分子却不容易通过击穿的小孔。由于渗透压的不平衡,水和部分离子及小分子会进入细胞,导致细胞继续膨胀而破裂,除非细胞膜在破裂前就复原。如果要避免细胞破裂,往往需要在细胞外的缓冲液中加入大分子(如糖类)以维持渗透压平衡。
 
在很多情况下,允许细胞稍微膨胀,会有助于引导药物和分子进入细胞,当水或缓冲液进入细胞时,会把孔道扩大,同时溶在缓冲液中的成分会随水流被带进细胞。所以一般在穿孔之前,把细胞放入稍低渗透压的缓冲液中,让细胞略微膨胀,细胞膜的张力也因而增高,横向张力可以帮助电压力穿破细胞膜。

全国统一服务电话

电子邮箱:13683161143@163.com

公司地址:旭辉空港中心

业务咨询微信

微信公众号